紫外分光光度計的入門知識講解
發(fā)布日期：2017-03-23 瀏覽次數(shù)：2268
紫外分光光度計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光源，光源透過測試的樣品后，部分光源被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。分光光度計已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。
分光光度計要測量的樣品必須是均一的溶液，不能有沉淀，如果有沉淀的話就要搖勻。而分光光度法則是通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度，對該物質(zhì)進行定性和定量分析。
常用的波長范圍為：200～400nm的紫外光區(qū)；400～760nm的可見光區(qū)；2.5～25μm的紅外光區(qū)。
所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計（或比色計）、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準確度，所有儀器應(yīng)按照國家計量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定，定期進行校正檢定。
單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度（光路長度）成正比，其關(guān)系如下式：1 A=log—=ECL T；式中A為吸收度；T為透光率；E為吸收系數(shù)，采用的表示方法是(E1％1cm),即吸收度換算成溶液濃度為1％(g/ml)，液層厚度為1cm的數(shù)值；C為100ml溶液中所含被測物質(zhì)的重量，g(按干燥品或無水物計算）；L為液層厚度，cm。
物質(zhì)對光的選擇性吸收波長，以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后,可用同樣條件將該供試品配成溶液，測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見光區(qū)，除某些物質(zhì)對光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒有吸收,但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多，且常使用單色光純度較差的儀器，故測定時應(yīng)用標準品或?qū)φ掌吠瑫r操作。
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